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產(chǎn)品名稱:

HFOB1.19人成骨細胞

產(chǎn)品型號: 產(chǎn)品時間: 2024-07-28
HFOB1.19人成骨細胞
該細胞公司*,培養(yǎng)狀態(tài)下的,現(xiàn)貨一周供應(yīng),我公司可100%保障該細胞的質(zhì)量,代數(shù)年輕活性好,不含有細菌、真菌、病毒(HIV、HBV、HCV)、支原體 。

產(chǎn)品概述

HFOB1.19人成骨細胞

生長狀態(tài):貼壁
運輸方式:干冰/常溫
物種來源:
組織來源:
細胞類型:細胞系
數(shù)量:5*105
英文名:Hfob1.19

細胞處理方法:
一、貼壁細胞
1、 接收到細胞,肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞 100X,200X 各一張)。
2、用 75%的酒精消毒外包裝,在超凈工作臺內(nèi)打開外包裝。
3、嚴格遵循無菌操作規(guī)范,打開細胞培養(yǎng)瓶。
4、37度平衡1-2小時。
5、用移液管吸取培養(yǎng)基,到50ml離心管中,剩下細胞密度達到80%至90%可以傳代,如沒有達到添加6ml新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
6、如果肉眼檢查上清有細胞,對50ml上清進行離心收集細胞,如果細胞連片狀態(tài),棄掉上清對收集的細胞進行胰酶消化(1ml胰酶37度),接種培養(yǎng)。

二、懸浮細胞
1、接收到細胞,肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞 100X,200X 各一張)。
2、用 75%的酒精消毒外包裝,在超凈工作臺內(nèi)打開外包裝。
3、嚴格遵循無菌操作規(guī)范,打開細胞培養(yǎng)瓶。
4、細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒)。
5、1000rpm,5min 離心,用吸管小心吸出上清,加入培養(yǎng)基,重懸細胞。
6、將重懸好的細胞轉(zhuǎn)入六孔板或者細胞培養(yǎng)瓶種,加入新鮮培養(yǎng)基,置于 37℃,5%CO2 培養(yǎng)(大部分細胞)

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杭州

HFOB1.19人成骨細胞

培養(yǎng)步驟

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:

1) 準備基礎(chǔ)培養(yǎng)基( GIBCO,,添加NaHCO3 1.5g/L,丙酮酸鈉 0.11g/L);優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。

二. 細胞處理:

1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進行凍存。

細胞注意事項:

1.收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2.先不開瓶蓋,瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置數(shù)小時(4h左右),穩(wěn)定細胞狀態(tài),切忌在溫箱內(nèi)靜置過夜。

3.靜置后鏡檢,拍照,記錄細胞狀態(tài)。建議傳代后也拍照記錄細胞生長情況。

4.  懸浮細胞:將細胞瓶內(nèi)液體都轉(zhuǎn)移至無菌離心管內(nèi),1000 轉(zhuǎn)/分鐘離心5min,培養(yǎng)基上清可備用,管底細胞沉淀用培養(yǎng)基重懸。鏡檢時若細胞密度超過80%,可將細胞懸液分至2個細胞瓶內(nèi)培養(yǎng);若密度未超過80%,細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),待達到80%時再正常傳代。備注:聚團生長慢,有密度依賴,必須使用T25培養(yǎng)瓶豎立培養(yǎng),3天一次半量換液一次,1-2周傳代一次

貼壁細胞:若細胞密度超過80%,可正常傳代;若未超過80%,收集細胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基,留8ml繼續(xù)培養(yǎng)至80%左右再傳代,瓶蓋可稍微擰松。備注:細胞貼壁慢,傳代后細胞放2天不動

5.細胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基含血清和雙抗,可收集后4℃保存?zhèn)溆茫裳a加2%血清。剛開始傳代時建議一半用細胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基,一半用客戶自備的培養(yǎng)基,使細胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件,以免因不適應(yīng)而造成生長狀態(tài)不佳。

 

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